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液相色谱柱使用、分析、储存的10个注意事项

点击次数:294发布时间:2021-10-27

液相色谱柱使用、分析、储存的10个注意事项



1.确保流动相洁净,每隔24-48小时就应新配水相流动相,并同时更换或仔细清洗流动相溶剂瓶,以避免流动相长菌。确保实验室纯水系统工作正常。


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2.确保样品不含颗粒型杂质。如样品过脏,或有微粒存在,需要考虑适合的样品制备方法。在使用样品过滤器时,确保滤膜为0.22 μm,且与样品溶剂完全兼容(不发生溶解)。也可考虑使用高速离心法去除颗粒性杂质,例如8000 rpm转速以上离心20分钟后,移取样品上清液进样。

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3.确保样品溶液与流动相条件兼容,进样后不会发生沉淀、或溶剂不互溶情况。通常使用流动相或比流动相洗脱强度弱的溶液(即有机溶剂比例较低)溶解或稀释样品,这样可以获得优异的峰形和检测灵敏度。


4.如系统在线混合生成流动相,预先检查流动相各组分的兼容性。例如,当磷酸盐缓冲液与高浓度乙腈(例如≥70%)混用时,可能发生盐析出。


5.了解色谱柱的操作使用限度。如果所使用的流动相条件、柱温、以及样品溶液条件,不利于色谱柱寿命时,请使用保护柱以延长柱寿命。


6.在使用流动相进行柱平衡之前,如果流动相中含有可能析出的缓冲盐,先使用5倍柱体积的有机溶剂-水溶液进行过渡。例如,在使用40/60 甲醇/磷酸盐缓冲液流动相之前,先使用5倍柱体积的40/60 甲醇/纯水溶液冲洗色谱柱。


7.在常规分析过程中,每针或间隔若干针清洗柱内可能积累的污染物。完成分析后,彻底清洗色谱柱,除去柱内缓冲盐和污染物。


8.在色谱柱使用过程中,定期进行柱效测试,记录塔板数与压力,从而追踪监控色谱柱的性能变化。柱效测试方法应固定。


9.反相色谱柱应保存于合适的高比例或100%有机相(如乙腈或甲醇)中。如色谱柱使用于高温或严格的PH条件,或停用色谱柱超过72小时,用100%乙腈保存色谱柱。


10.使用原配的柱堵头,确保堵头拧紧以避免柱内溶剂挥发。取放色谱柱时避免磕碰掉落。


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