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Kinetex HPLC/UHPLC 色谱柱 保养与使用提示

点击次数:70发布时间:2021-07-16

Kinetex HPLC/UHPLC 色谱柱保养与使用提示

一般信息

Phenomenex 制造的每支 Kinetex 色谱柱都经过单独准备和检测。每支色谱柱都附带一份质量保证证书 (CQA),证书中说明了测试条件、工作温度和色谱柱详细信息。将色谱柱详细信息(例如规范和性能测试结果)输入您的信息管理系统,即可轻松地进行跟踪和参考。

检验

收到色谱柱后,请验证您手上的色谱柱是您所订购的色谱柱(即规格、粒径和填料均是您选择的值)。此外,也要检查色谱柱是否在运输期间产生损伤。检查后应立即测试色谱柱以验证性能,并将测试结果记录到您的色谱柱信息管理系统中。


色谱柱特性

Kinetex

固定相

 

出厂溶剂

粒径

(µm)

孔径

(Å)

表面积

(m2/g)

碳容量

(%)

 

pH 稳定性

 

反相

 

 正

 

    HILIC

100%

水相稳定

Polar C18

乙腈/水 (50:50)

2.6

100

200

9

1.5-8.5*

 



 

C18

乙腈/水 (50:50)

1.31.72.65

100

200

12

1.5-8.5*

 




EVO C18

乙腈/水 (45:55)

1.72.65

100

200

11

1-12

 



 

    

XB-C18

乙腈/水 (50:50)

1.72.63.55

100

200

10

1.5-8.5*

 




C8

乙腈/水 (45:55)

1.72.65

100

200

8

1.5-8.5*

 




Biphenyl

乙腈/水 (45:55)

1.72.65

100

200

11

1.5-8.5*

 



 

Phenyl-Hexyl

乙腈/水 (45:55)

1.72.65

100

200

11

1.5-8.5*

 




F5

乙腈/水 (40:60)

1.72.65

100

200

9

1.5-8.5*

 


 

        

 

HILIC

乙腈/100   mM 甲酸铵 (93:7)

1.72.65

100

200

0

2.0-7.5


        

 √

                                   



† 出厂溶剂的有机溶剂与水溶性溶剂比可能会稍有不同,具体取决于色谱柱规格。

* 梯度条件下的 pH 范围。等度条件下的 pH 范围为 1.5-10。


典型流速、背压、温度:

下面是常见规格的 Kinetex HPLC 和 UHPLC 色谱柱的一些典型值。这些数字不是绝对值,并且在不同的液相色谱系统、运行参数和样品分析物/基质下可能不同。以下数值经由使用乙腈和水组成的溶剂系统创建。

粒径

(µm)

内径

(mm)

典型流速

(mL/min)

典型压强 (PSI)

50 mm**

150 mm**

250 mm**

1.3

2.1

0.5

10500

1.7

1.0

0.1

2600

1.7

2.1

0.5

5300

7300

1.7

3.0

0.3

7000

2.6

1.0

0.1

1700

4300

2.6

2.1

0.5

3000

6800

2.6

3.0

0.8

2300

5900

2.6

4.6

1.8

2800

5300

6900

3.5

4.6

1.5

2600

5

2.1

0.3

580

1200

5

3.0

0.5

620

1050

5

4.6

1.3

1100

1600

1700

5

10

5

2100

3000

5

21.2

25

630

1300

2300

5

30

50

670

1600

2300

5

50

80

1000

典型流速(不受粒径影响):

i. 4.6 mm 内径为 1.0 mL/min

ii. 2.1 mm 内径为 0.2-0.6 mL/min

iii. 1.0 mm 内径为 0.02-0.1 mL/min

背压上限:

iv. 对于 1.3 μm,大于 15,000 psi (1,034 bar) 可能会缩短色谱柱使用寿命。

v. 对于 1.7 μm,大于 15,000 psi (1,034 bar) 可能会缩短色谱柱使用寿命。

vi. 对于 2.1 mm 内径,大于 15,000 psi (1,034 bar) 可能会缩短色谱柱使用

寿命。

vii. 对于 3.0 和 4.6 mm 内径,大于 8700 psi (600 bar) 可能会缩短色谱柱使

用寿命。

温度上限:

viii. Kinetex 液相色谱柱的建议温度上限不超过 60°C,不过,温度限值取决于

您的运行参数。在 60°C 下以大于 8 的 pH 运行将缩短色谱柱使用寿命。

ix. 在温度限值下连续使用 Kinetex 色谱柱可能会缩短色谱柱使用寿命。


流动相兼容性

使用任何 HPLC/UHPLC 色谱柱时,务必使用 HPLC 级溶剂和材料,同时也要避免不混溶的溶剂/缓冲液组合。此外,强烈建议过滤溶剂以移除所选流动相中的微量物质。以下 Kinetex 相可以在 100% 水溶性条件下保持稳定:Polar C18、EVO  C18、Biphenyl 和 F5。对于所有 Kinetex 色谱柱,请确保流动相 pH 不超过各种固定相的限值。请参见色谱柱特性部分中的图表,了解各种 Kinetex 固定相的 pH 限值。


色谱柱安装

您的液相色谱系统的初始设置对确保色谱柱性能至关重要:确保您的液相色谱系统满足以下条件:

1. 密封、管线和进样器清洁

2. 已预充管线(没有干燥的管线或气泡)

3. 基线稳定

4. 压强一致

使用 HPLC 级、与色谱柱的出厂溶剂混溶的流动相冲洗液相色谱系统泵和管线。

流动相起始条件检查清单:

1. 使用前,确保 HPLC 级流动相已混合均匀、过滤和脱气。

2. 确保色谱柱出厂溶剂、液相色谱系统内的剩余溶剂和流动相溶剂混溶。


将流速设置为 0.1 mL/min(适用于 2.1-4.6 mm 内径),安装色谱柱,确保箭头方向与流动方向一致。将流速升高至 0.2 mL/min(2.1mm 内径)或1.0 mL/min(4.6 mm 内径),保持 5-10 分钟。使用小烧杯收集溶剂。

停止流量并擦洗色谱柱的出样口端以移除任何颗粒,然后再连接到检测器。

将接头/管线安装到出样口端,并以较低的流速(约 0.2 mL/min)至少通过10 倍于色谱柱容积的溶剂,同时监测背压。

1. 压强稳定说明流速一致,压强波动则说明系统中存在气体。

2. 压强大范围波动可能会冲击和损坏色谱柱,因此,监测压强至关重要。

监测压强和检测器信号,在两者均稳定后,色谱柱可以投入使用。


测试色谱柱性能

测试色谱柱性能时,请使用制造商批准的测试混标。

反相

名称:

反相测试混标 2

货号:

AL0-3045

组成:

尿嘧啶、苯乙酮、甲苯、萘

溶剂:

乙腈/水(体积比为   65:35

检测:

UV / 254 nm

进样量:

取决于规格

HILIC

名称:

HILIC 相测试混标

货号:

AL0-8317

组成:

甲苯、尿嘧啶、胞嘧啶

溶剂:

乙腈(含有甲苯)/水   (85:15)

检测:

UV / 254 nm

进样量:

取决于规格

色谱柱清洗

反相:

• 使用与系统上一次所用溶剂系统最为接近的梯度清洗:

例如,如果上一次进样使用的是缓冲液/乙腈 (75:25),则最好以 95:5 水/乙腈开始,然后根据需要逐步提高有机溶剂的含量(即 75:25 水/乙腈à50:50 水/乙腈à5:95 水/乙腈)。

• 对于疏水性或油性物质,请在使用乙腈冲洗色谱柱后尝试使用异丙醇(IPA) 冲洗。使用 IPA 时,确保使用低流速,以免较大的溶剂粘度引起较高的背压。

• 对于疏水性强的物质,请使用四氢呋喃 (THF)。

HILIC:

• 要移除缓冲液,请至少使用 10 倍于色谱柱容积的 95:5 水/乙腈冲洗。使用 95:5 的 100 mM 乙酸铵 (pH 5.8)/乙腈重复冲洗。然后,使用 95:5 的水/乙腈冲洗色谱柱,进行最后的清洗。

提示:

• 清洗时,将流速设置为低于方法流速,尤其是在尝试使用甲醇或 IPA 清洗时。

• 长时间冲洗一般比多次冲洗的效果好。

• 在系统使用 PEEK 管线的情况下,不建议使用大量的 THF。如果线为金属材质,则可以使用 THF。

• 可以反向冲洗色谱柱(沿着与色谱柱标签上箭头指示相反的方向),但请使用低流速。下面是不同色谱柱内径的建议反向冲洗流速:

0.1 mL/min(2.1 mm 内径)

0.3 mL/min(3.0 mm 内径)

0.5 mL/min(4.6 mm 内径)

色谱柱再生

反相

• 使用与上面清洗步骤相同的冲洗梯度以低流速冲洗过夜。

• 可以进行反向冲洗。

正相

• 要移除水,请使用以下溶液冲洗:

1. 30 mL 2.5% 的 2,2-二甲氧基丙烷和含 2.5% 冰乙酸的己烷

2. 然后,使用上面的清洗方法以低流速过夜冲洗色谱柱。

色谱柱储存

储存前,务必确保您的色谱柱清洁。包括移除缓冲液、盐、样品和离子配对剂。建议的储存条件为:

• 反相:可以使用乙腈/水(体积比为 65:35)和甲醇替代乙腈。

• 正相:100% 己烷或 IPA

• HILIC:乙腈/水(体积比为 80:20)

• 请仅使用 HPLC 级或更高级别的溶剂储存。

延长色谱柱使用寿命的提示

• 利用固相萃取(Strata®-X SPE 产品)等样品制备技术或配件(Phenex™ 针头式过滤器),以便尽可能减少进入您的系统和色谱柱上的污染物。

• 使用合适的保护柱、保护柱系统 (SecurityGuard™) 在微粒阻塞您的色谱柱之前将其移除。

• 不要让色谱柱过载。进样合适的样品浓度和体积。

• 在色谱柱的适当分离模式下工作。请参见色谱柱特性表,了解每种固定相适合的典型模式。

• 将您的色谱柱储存在合适的溶剂中。

• 以较低流速从一种混溶溶剂缓慢富集到另一种,正确执行溶剂切换:2.1 mm 内径为 0.1 mL/min,4.6 mm 内径为 0.5 mL/min。

色谱柱保修

Phenomenex 保证其 HPLC 色谱柱符合声明的性能和质量水平,并且不存在材料和工艺缺陷。如果您出于任何原因而不满意,请致电您的 Phenomenex 技术代表。我们将竭尽全力解决您的问题,并让您满意。如果需要退回色谱柱,必须先

从 Phenomenex 获得退回授权号。

免责声明

分析之前,应使用制造商建议的测试混标测试新色谱柱,并使用相同或合适的测试混标测试之前用过的色谱柱。更换溶剂时请记得重新平衡系统。请勿从一种溶剂切换到另一种不混溶的溶剂,并且也不应使用与两者都不混溶的中间溶剂。否

则将损坏色谱柱。如果缓冲液/盐在第二种溶剂中不溶解,请勿在缓冲液/盐溶液之间来回切换。否则也会损坏色谱柱。切勿尝试移除色谱柱端接头。这将导致保修无效。

色谱柱冲击

小心处理色谱柱。请勿掉落或者造成物理冲击。请勿以高流速开始泵送,而应在几分钟内缓慢增大流速。设置您的泵压强限值,在发生阻塞时为色谱柱提供保护。阻塞将产生空隙,这会降低色谱柱的性能。


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