欢迎来到厦门广晟达仪器设备有限公司网站!
文章详情
首页 > 技术文章 > Luna C18及Luna系列色谱柱的保养和使用技巧

Luna C18及Luna系列色谱柱的保养和使用技巧

点击次数:301发布时间:2021-05-11

一般信息

Phenomenex制造每个Luna色谱柱都是单独制备和测试的。每根色谱柱均有一份质量保证(CQA)证书,其指示检测条件,运行参数,和色谱柱的信息。该色谱柱的详细信息,包括规格和性能测试结果应被输入到信息管理系统,方便跟踪和参考。您还可以从以下网站获取质量文档的电子副本

检查

收到色谱柱后,请确认您收到的色谱柱是您订购的色谱柱(即尺寸,粒径,介质)。此外,请检查色谱柱是否在运输过程中可能造成任何物理损坏。立即测试色谱柱以验证性能并将测试结果记录在色谱柱信息管理系统中。

​​​色谱柱特

*在梯度条件下的pH稳定性。在等度条件下,pH稳定性为1.5-10。

*在梯度条件下,pH范围为1.5-9。在等度条件下,pH范围为1.5-10。

运输溶剂

除非在色谱柱标签上另有说明,否则Luna CN和NH 2色谱柱以乙腈/己烷(1:99 v / v)装运。Luna SCX色谱柱以150 mM 磷酸铵(pH 6.0)装运,Luna HILIC色谱柱以HILIC条件(乙腈/ 100 mM甲酸铵pH 3.2(90:10 v / v))装运。所有其他Luna固定相均已装运乙腈/ H2O(65:35 v / v)。

典型流量,背压,温度:

以下是Luna HPLC和UHPLC色谱柱通用尺寸的一些典型值。这些数字不是绝对值,并且会 根据液相色谱系统,运行参数和样品分析物/基质而有所不同。下面的值是使用乙腈和的溶剂系统创建的

典型流速(与粒径无关):

                  1、内径4.6 mm时为1.0 mL / min

                  2、内径2.1 mm时为0.2-0.6 mL / min

最大背压:

                  3、1.6um>15,000psi(1034bar)可能损害柱寿命。

                  4 、3μm或5μm > 5000 psi(345 bar)可能会损害色谱柱的寿命。

最高温度:

                  5、Luna色谱柱推荐最高温度是60℃,但温度范围依赖于你的运行参数。

                  6、在最高温度极限下连续使用Luna色谱柱可能会损害色谱柱的使用寿命。

                  7、基于常见的流动相扩大了Luna Omega相的温度使用范围:

                               a.甲酸:90°C(C18,Polar C18),80°C(PS C18)

                               b.三氟二酸:80°C(C18,Polar C18), 60°C(PS C18)

                               c. pH 7.5磷酸盐缓冲液:50°C(C18), 30°C(Polar C18),50°C(PS C18)

                               d. pH 8.5的碳酸氢铵缓冲液:50°C(C18),30°C (Polar C18),50°C (PS C18)

流动相兼容性

当使用任何HPLC / UHPLC柱,一定要使用仅HPLC级溶剂和材料,同时也避免不混溶的溶

剂/缓冲溶液。

此外,强烈建议使用溶剂过滤来从您选择的流动相中除去痕量杂质。以下Luna系列色谱柱在

100%水性条件下稳定:Polar C18,PS C18,PFP( 2)和SCX。所有Luna色谱柱在100%

有机条件下均稳定,但请确保流动相的pH值不超过各个固定相的限值。有关各个Luna固定

相pH限值的信息,请参见色谱柱特征部分中的图表。

 

色谱柱安装

LC系统的初始设置对于确保色谱柱性能非常重要:

确保您的液相色谱系统已准备就绪:

1.密封管路,进样口清洁

2.流动相管路无干线或气泡

3.稳定的基线

4.一致的压力

用流动相冲洗液相色谱系统泵和管线(HPLC级,可与色谱柱附带的溶剂混溶)。

流动相起始条件检查清单:

1.在使用前,请确保HPLC级流动相充分混合,过滤和脱气。

2.确保色谱柱运输溶剂,液相色谱系统中剩余的溶剂和流动相溶剂可混溶。

将流速设置为0.1 mL / min(对于2.1-4.6 mm内径),并安装色谱柱,确保箭头指向流动方向。然后将流速增加至0.2 mL / min(2.1mm 内径)或1.0 mL / min(4.6 mm 内径)5-10分钟。将溶剂收集在一个小烧杯中。

停止流动 ,并擦拭出口端的柱 ,以除去任何颗粒连接到前检测器。

将配件/管安装到出口端,并在监测背压的同时以低流量(〜0.2 mL / min)运行至少10个色谱柱体积。

1.稳定的压力应表示流量恒定,而压力波动则表示系统中有空气。

2.在压力宽波动可能冲击和损坏列,以便监视它的重要压力。

监测压力以及检测器发出的信号,当两者稳定后,就可以使用色谱柱了。

测试色谱柱性能

测试色谱柱性能时,请使用制造商认可的测试混合物。

色谱柱清洗

色谱柱清洗

反相:

   用接近系统上最后一个溶剂系统的梯度进行清洁:

典型的装载能力

例如,如果最后一次进样以缓冲液/乙腈(75:25)结尾,则更合适的方法是从95:5 H 2 O /  乙腈开始,然后根据需要逐步移动以增加

有机物含量(即75:25 H 2 O /乙腈50:50 H 2 O /乙腈5:95 H 2 O /乙腈)。

   对于疏水性或油性材料,请尝试用二氯甲烷冲洗 。

或IPA。使用IPA时,请确保使用低流量以防止由于较高的溶剂粘度而导致较高的背压。

   对于疏水性很强的材料,请尝试使用THF 。

正常阶段:

   用10倍柱体积的氯仿,IPA和/或二氯甲烷进行冲洗。

   然后用流动相进行调节。

Tips:

   清洁时,将流速设置为低于方法流速 。

   特别是在尝试使用甲醇或IPA进行清洁时。

   较长时间的清洁比增加更多的循环更有利。

   建议不要使用非常大量的THF,特别是如果系统有塑料管。如果管道是金属,则用THF清洗是可以的。

   尝试反向冲洗色谱柱;逆着列标签上箭头的方向缓慢流动。

柱再生

反相•   进行与上述清洁相同的梯度冲洗,并在低流量下通宵过夜。

正相•   为了除水,请冲洗:

1.30毫升己烷中的2.5%2,2 二甲氧基丙烷和2.5%冰醋酸。

2.然后从上方用清洗方法冲洗色谱柱,以低流速过夜 。

柱存储 

在保存之前,请确保您的色谱柱是干净的,这一点非常重要。这包括去除缓冲液,盐,样品和离子对试剂。

推荐的存储条件是:

   反相:乙腈/ H 2 O(65:35 v / v),可用甲醇代替乙腈。

   正相:100%己烷或IPA

   离子交换:100%甲醇

•   HILIC:乙腈/ H 2 O(80:20 v / v)

延长色谱柱寿命的技巧

   利用样品制备技术,例如固相提取(地层® -X SPE产品)或配件(PHENEX ™注射式过滤器) ,以不希望的污染物的喷射最大限度地减少到您的系统和柱。

   使用正确的保护柱或保护柱系统(SecurityGuard ™)帮助清除颗粒,以免污染 色谱柱。

   不要使色谱柱超载。注入合适的样品浓度和体积。见图表:典型 加载 容量

   在色谱柱的合适分离模式下工作 。有关每个固定相使用的典型模式,请参见列特性图。

   将色谱柱存放在适当的溶剂中。

   溶剂通过从一个混溶相缓慢驯化正确地切换 溶剂 到 所述 其他 在 一个 低 流量: 0.1 毫升/分钟 为 2.1 毫米 ID 和内径4.6 mm时为0.5 mL / min。

保修

Phenomenex HPLC色谱柱保证达到规定的性能和质量,并且不存在材料和工艺上的缺陷。如果您不满意的任何理由,请致电PHENOMENEX售后技术部。我们将竭尽所能解决问题,使您满意。如果有必要退回该列,则必须先从Phenomenex获得退回授权号。

免责声明

新色谱柱应使用制造商推荐的测试混合物进行测试,而先前使用的色谱柱应使用相同或合适的测试混合物进行分析。记得重新平衡系统使用高纯度的溶剂。切勿从一种溶剂变为不混溶的另一种溶剂,而不要经过可与两种溶剂混溶的中间溶剂。这会损坏色谱柱。切勿将缓冲液/盐不溶于第二种溶剂的溶液更改为缓冲液/盐的溶液。同样,这会损坏色谱柱。切勿尝试卸色谱柱,这将使保修无效。

柱震荡

小心处理色谱柱。请勿跌落或造成物理震动。不要以高流量启动泵,而要在几分钟后逐渐增加流量。设置泵压力极限,以在发生堵塞时保护色谱柱。这会产生空隙,将对色谱柱的性能产生不利影响。

感谢您的阅读。若有色谱柱疑问请咨询飞诺美代理商:厦门广晟达仪器设备有限公司

 

Copyright © 2021 厦门广晟达仪器设备有限公司 版权所有